La méthode de centrifugation à gradient de densité est également connue sous le nom de centrifugation de zone.

De cette méthodeAvantagesIl est possible de séparer plusieurs ou tous les composants de l'échantillon en même temps, avec une bonne résolution, un bon effet de séparation, peut obtenir des composants plus purs à la fois.

défautC'est un temps de centrifugation plus long, nécessaire pour préparer le liquide de gradient, les exigences de fonctionnement sont élevées.

Selon le principe de séparation centrifuge, la centrifugation à gradient de densité peut à son tour être divisée enZone de taux avec méthode centrifuge(méthode de centrifugation zonale, R-Z) 和Méthode centrifuge isodensité (méthode de centrifugation isopycnique).

La centrifugation par bande de vitesse, également appelée centrifugation par densité isozone, consiste à purifier un échantillon mixte par séparation centrifuge en fonction de différentes tailles de volume et de différents coefficients de sédimentation des particules des différents composants de l'échantillon.

La solution d'échantillon à séparer est placée au - dessus d'une colonne liquide de gradient formée de matériaux à gradient de densité tels que le Saccharose, le chlorure de césium (CSCI), * etc. lors de la centrifugation, la densité des particules de l'échantillon doit être supérieure à celle de n'importe quel point de la colonne liquide de gradient, sinon l'effet idéal de centrifugation en zone ne peut être obtenu. Lors de la centrifugation, les différents composants de l'échantillon mélangé formeront séparément leurs bandes de zones respectives à différents endroits de la colonne de liquide gradient, en choisissant la vitesse de rotation et le temps appropriés pour la centrifugation, en terminant la centrifugation lorsque chaque groupe de bandes de partition est tiré loin, puis en retirant les bandes de zones.De cette façon, il suffit d'une centrifugation pour purifier la séparation des composants de l'échantillon mélangé, dont la pureté et le taux de récupération répondent aux exigences.

AvantagesIl s'agit d'une purification par séparation, le coefficient de sédimentation des composants diffère de plus de 20% peut être choisi pour cette méthode, la résolution est élevée, la compétence opérationnelle peut varier le coefficient de sédimentation des composants de 5 à 10% pour une bonne séparation des échantillons.

défautEst la limite de l'état du matériau, la concentration de liquide d'échantillon ne peut pas être trop élevée, sinon les conditions de fonctionnement sont difficiles à contrôler, tandis que cette méthode est comparée à la méthode de centrifugation différentielle, la quantité d'échantillon traité est plus petite.

Figure 1 zone de taux avec centrifugation

Le temps de centrifugation de la zone de vitesse doit être strictement contrôlé et ne doit pas être trop court, sinon la zone d'échantillon n'est pas claire et le temps ne doit pas être trop long, sinon les composants à séparer peuvent s'affaisser. La vitesse de sédimentation des particules de l'échantillon à séparer dépend de facteurs tels que la forme, la taille, la densité et la force centrifuge des particules. L'état de l'échantillon avant et après centrifugation est représenté sur la figure 1.

L'application classique de la centrifugation par bande de vitesse est la centrifugation par gradient de densité de saccharose pour la purification de divers organites subcellulaires (Ribosomes, mitochondries, Exosome...) et de particules virales (vecteurs viraux, vaccins...). Par example, le précipité ribosomique 70s que nous avons obtenu au stade précédent, après hydrolyse, peut être centrifugé à l'aide d'un gradient de densité de saccharose et purifié pour donner les deux sous - unités 50s et 30s. Le processus expérimental spécifique est le suivant:

La classe de centrifugation est sérialisée, avec un souci constant d'en savoir plus sur les méthodes de centrifugation!

Focus sur les classes centrifuges passées

□Centrifugation termes communs – force centrifuge et force centrifuge relative

□Coefficient de sédimentation des termes usuels

□Préparation de sérum sans exosomes par centrifugation rapide

□Efficacité de la tête rotative facteur K et temps de centrifugation

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* Numéro d'approbation: RA - 051 - cent - adv - ruo

* Date de révision: 2020 / 10 / 16

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