Au cours de l'expérience, en raison des différentes différences de propriétés des échantillons, les résultats de purification de séparation attendus ne peuvent être obtenus que si la bonne méthode de centrifugation a été choisie. Les méthodes de centrifugation couramment utilisées sont principalement la méthode de centrifugation différentielle, la méthode de centrifugation à gradient de densité. La centrifugation à gradient de densité peut à son tour être subdivisée en centrifugation à bande de vitesse et centrifugation à gradient d'isodensité. Ce numéro vous présente spécifiquement la centrifugation différentielle de la méthode de centrifugation.

Différence de méthode de centrifugation centrifugation

La méthode de centrifugation différentielle est également connue sous le nom de méthode de séparation différentielle par force centrifuge.

Principe de la centrifugation différentielle

En utilisant la différence du coefficient de sédimentation de chaque composant dans l'échantillon, différentes forces centrifuges sont appliquées aux différentes particules, après de nombreuses centrifugations, la vitesse de centrifugation est progressivement augmentée, les différentes particules sont décantées à leur tour, ce qui permet la séparation centrifuge.

Le principe de centrifugation différentielle est illustré par l'expression de la force centrifuge: f = ma, où a = ω2r.

En raison de la petite masse de particules de petite taille, la force centrifuge requise lors de la séparation est grande. Pour répondre aux besoins de la grande force centrifuge, il est nécessaire d'augmenter sa vitesse de rotation pour pouvoir être séparé. La séparation de particules de tailles différentes avec des forces centrifuges différentes est une méthode de séparation cinétique, en particulier pour les particules avec des vitesses de sédimentation plus variables.

S'il y a trois particules de taille différente dans l'échantillon séparé, grandes et petites, sur lesquelles une force centrifuge différente est appliquée, les particules de grande taille, dont la masse est plus grande, se déposeront en premier; Séparation du surnageant, deuxième centrifugation du surnageant à plus grande vitesse de rotation, les particules moyennes étant séparées; Le dégagement supérieur est repris avec une plus grande force centrifuge, une vitesse de rotation plus élevée, après quoi les petites particules sont décantées pour atteindre la séparation des différentes particules, comme le montre la figure 1.

Figure 1 centrifugation différentielle

Étant donné que le précipité de chaque particule contient toujours une partie des particules secondaires, si vous souhaitez purifier une particule, il est nécessaire de diluer le précipité de cette particule et de centrifuger le précipité, ce qui permet finalement de préparer des particules de pureté idéale.

Avantages et inconvénients de la centrifugation différentielle

La centrifugation différentielle est principalement utilisée pour séparer les particules avec de grandes différences de diamètre et de densité, ses avantages sont un temps de séparation court, une grande Répétabilité et un grand volume de traitement des échantillons, qui peut être utilisé pour la séparation initiale d'un grand nombre d'échantillons.

Mais lors de la séparation d'échantillons complexes en utilisant la méthode de centrifugation différentielle, ou lorsque les exigences de pureté de séparation sont élevées, il faudra effectuer plusieurs centrifugations, les opérations sont compliquées; Deuxièmement, en raison du nettoyage multiple, de la dissolution et de la reprécipitation du précipité, il est facile de provoquer des pertes intermédiaires, ce qui entraînera un problème de mauvaise résolution centrifuge; De plus, la séparation proprement dite ne peut être réalisée * Pour certains composants dont les coefficients de sédimentation diffèrent peu en raison de la convection lors de la centrifugation, de la diffusion et de la contamination lors de la collecte des précipités. En raison des limitations de la centrifugation différentielle en termes de pureté et de récupération de l'échantillon, il est principalement utilisé pour la purification de séparation préliminaire d'un grand nombre d'échantillons en préparation de la prochaine étape de détection ou d'expérimentation.

Par exemple, nous pouvons effectuer un certain nombre de centrifugations et de décantation / surnageant des homogénats de tissus hépatiques animaux avec différentes forces centrifuges relatives et des temps de collecte étape par étape pour obtenir des précipités enrichis isolés préliminaires des noyaux, des mitochondries, des lysosomes et des Ribosomes, etc. de l'échantillon pour d'autres tests ou des expériences de purification fine pour l'étape suivante. Les processus de traitement spécifiques sont les suivants:

La classe de centrifugation est sérialisée, avec un souci constant d'en savoir plus sur les méthodes de centrifugation!