La culture de cellules rénales embryonnaires humaines 293t nécessite la préparation d'un milieu dmem - H, 90%; Sérum de veau foetal de haute qualité, 10%. Le milieu de suspension peut également être choisi selon les besoins expérimentaux pour permettre aux cellules 293t de croître en suspension.

1, conditions de culture: phase gazeuse: air, 95%; CO2, 5%. Température: 37 degrés Celsius, l'humidité de l'incubateur est de 70% - 80%.

2, lyophilisat: milieu de culture 90% * 10% DMSO, maintenant adapté. Stockage d'azote liquide.

3, réanimer les cellules: le lyophilisateur contenant 1 ml de suspension cellulaire est rapidement secoué dans un bain - Marie à 37 ° C pour décongeler, ajouter 4 ml de milieu de culture pour mélanger uniformément. Centrifuger 4 min à 1000 RPM, éliminer le surnageant et bien souffler après addition de 1 - 2 ml de milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite ajoutées dans des flacons de culture pour une nuit ou dans des boîtes de 10 cm avec environ 8 ml de milieu de culture cultivé). Changez de liquide le lendemain et vérifiez la densité cellulaire.

4, passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée.

Si des cellules plaquées apparaissent au cours de la culture de cellules rénales embryonnaires humaines 293t, le passage peut se référer à la méthode suivante:

1, défricher le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

Ajouter 2 ml de digestat (0,25% Trypsin - 0,53 mmedta) dans un flacon de culture, placer à 37 ℃ incubateur pour la digestion pendant 1 - 2 minutes, puis observer la digestion des cellules au microscope, si la plupart des cellules deviennent rondes et tombent, rapidement revenir à la table d'opération, tapoter quelques flacons de culture après avoir ajouté une petite quantité de milieu pour terminer la digestion.

3, appuyez sur 6 - 8 ml / flacon pour compléter le milieu de culture, bien agiter après avoir aspiré, centrifuger à 1000 RPM pendant 4 minutes, retirer le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de milieu de culture après soufflage.

Distribuer la suspension cellulaire dans de nouvelles boîtes contenant 8 ml de milieu ou dans des flacons dans un rapport de 1: 2 à 1: 5.

5, lyophilisation cellulaire: lorsque l'état de croissance des cellules est bon, la lyophilisation cellulaire peut être effectuée. Lorsque les cellules collées sont congelées, une petite quantité * est ajoutée après avoir abandonné le milieu de culture, après que les cellules soient tombées en rond, dans le lyophilisateur après avoir ajouté environ 1 ml de milieu contenant du sérum et après avoir ajouté 10% de DMSO supplémentaire.

Au cours de la culture de cellules rénales embryonnaires humaines 293t, deux choses doivent être notées:

1. Après avoir reçu les cellules, s'il vous plaît contactez - nous immédiatement si vous trouvez que la glace carbonique a été volatilisée propre, le bouchon du tube de congélation est tombé, cassé et les cellules sont contaminées.

Toutes les cellules animales sont considérées comme potentiellement dangereuses sur le plan biologique et doivent être manipulées à l'intérieur d'une table de sécurité biologique de niveau 2, veuillez prendre soin de la protection, tous les déchets liquides et les ustensiles qui ont été en contact avec ces cellules doivent être éliminés après stérilisation.